ИФА-Краснуха IgG авидность

Категории: ЭКОлаб

Описание

ИФА-Краснуха IgG авидность № ФСР 2011/12217 от 03.11.2011
Комплект № 2 набора реагентов «ИФА-анти-Торч-IgG-авидность»(Набор реагентов для определения индекса авидности антител класса G к возбудителям инфекций группы TORCH методом иммуноферментного анализа). Видоспецифические антитела класса G к вирусу краснухи

ИНСТРУКЦИЯ

Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/08229 от 07.07.2010 г.

НАЗНАЧЕНИЕ

Выявление и определение содержания видоспецифических антител класса G к вирусу краснухи в сыворотке (плазме) крови людей методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) на твердофазном носителе при «ручной» постановке и с использованием ИФА-анализаторов.

СОСТАВ И КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА

Иммуносорбент	лизатный инактивированный очищенный антиген вируса краснухи (штамм HPV77, культивированный в клетках Vero), сорбированный на 96-луночном разборном полистироловом планшете для иммунологических реакций с плоским дном (используются «ломающиеся» стрипы)	1 планшет
Иммуносорбент	допускается раздельная упаковка стрипов (по 1-4 стрипа в пакете)
Контрольные положительные образцы 1, 2, 3 и 4_, (К⁺₁, К⁺₂, К⁺₃, К⁺₄)	инактивированные; К⁺₁ содержит 10 МЕ/мл антител класса G к вирусу краснухи, К⁺₂ – 20 МЕ/мл, К⁺₃ – 100 МЕ/мл, К⁺₄ – 200 МЕ/мл (содержание антител указывается также на этикетках контрольных положительных образцов); К⁺₁ – прозрачная, желтого цвета, жидкость; К⁺₂, К⁺₃, К⁺₄ – прозрачная жидкость красного цвета.	по 1 фл. (1,5 мл)
Контрольный отрицательный образец (К^–)	инактивированный; прозрачная, зеленого цвета, жидкость	1 фл. (1,5 мл)
Конъюгат	антитела моноклональные мышиные против иммуноглобулинов человека класса G, меченые пероксидазой хрена; прозрачная жидкость розового цвета	1 фл. (13 мл)
Раствор для разведения образцов (РРО)	прозрачная жидкость синего цвета	1 фл. (15 мл)
Раствор для предварительного разведения образцов (РПРО)	прозрачная жидкость розового цвета	1 фл. (по 15 мл)
25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином [ФСБ-Т(х25)]	прозрачная или слегка опалесцирующая бесцветная пенящаяся жидкость, возможно выпадение осадка солей белого цвета, растворяющегося при температуре 37 ⁰С в течение 30 мин.	1 фл. (80 мл) или 2 фл. (по 40 мл)
Раствор индикаторный (РИ)	прозрачная бесцветная жидкость.]	1 фл. (13 мл)
Стоп-реагент	прозрачная бесцветная жидкость.	1 фл. (12,5 мл)

Примечания. 1. Набор включает все реагенты, необходимые для постановки ИФА, кроме очищенной (дистиллированной иди деионизированной) воды.

ФСБ-Т(х25), РИ,РРО,РПРО, стоп-реагент – унифицированы для всех наборов ЗАО «ЭКОлаб», в которых используются указанные реагенты.

Дополнительно набор может быть укомплектован:

вспомогательными пластиковыми емкостями (4 шт.),

стрипированным планшетом для предварительного разведения образцов
(1 шт.),

одноразовыми наконечниками для автоматических пипеток (16 шт.)

клейкой пленкой для планшетов (4 шт.).

Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению и бланк калибровочного графика.

По желанию потребителя базовая комплектация набора (число индивидуальных упаковок с реагентами и их объемы) может быть изменена.

ОСНОВНЫЕ ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Базовый вариант комплектации набора позволяет одномоментное исследование 96 образцов, включая контрольные (на контрольные образцы используется 10 лунок и 1 лунка – для определения уровня «бланк»). Предусмотрена возможность проведения раздельных исследований с использованием необходимого количества стрипов:

Число стрипов	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
Число исслед. обр.	1-5	6-13	14-21	22-29	30-37	38-45	46-53	54-61	62-69	70-77	78-85

ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

При наличии в исследуемом образце антител класса G к вирусу краснухи они во время первой инкубации связываются с антигеном вируса краснухи, сорбированным на поверхности лунок полистиролового планшета. Этот комплекс во время второй инкубации связывается с конъюгатом – антителами против IgG человека, меченными пероксидазой хрена. Далее, после добавления индикаторного раствора (хромоген — тетраметилбензидин) в результате ферментативной реакции реакционная смесь в лунках планшета окрашивается в зависимости от концентрации антител класса G к вирусу краснухи. Реакция останавливается добавлением стоп-реагента. Интенсивность окрашивания (оптическая плотность) регистрируется с помощью спектрофотометра.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Аналитическая чувствительность (минимальное определяемое содержание иммуноглобулинов класса G к вирусу краснухи) – не более 10 МЕ/мл.

Аналитическая специфичность — не дает перекрестной реакции с иммуноглобулинами класса G к другим вирусам человека.

Воспроизводимость результатов в пределах одной постановки анализа

Коэффициент вариации ОП контрольных образцов – не более +7 %.

Воспроизводимость результатов между разными постановками анализа

Коэффициент вариации ОП контрольных образцов – не более +10 %.

Линейность

Зависимость между полученной величиной оптической плотности в образцах сыворотки крови и содержанием в них антител класса G к вирусу краснухи линейна в диапазоне от 10 МЕ/мл до 200 МЕ/мл.

ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Нативная сыворотка (плазма) крови человека объемом не менее 10 мкл.

Образцы сыворотки (плазмы) крови до исследования можно хранить не более 7 сут. при температуре от 2 до 8 ^оС и 3 мес при температуре минус 20 ^оС или более низкой. Допускается только однократное замораживание-размораживание образцов. Размороженные образцы перед исследованием тщательно перемешать.

Использование для исследования образцов с повышенным содержанием липидов и (или) с признаками гемолиза, и (или) с видимым микробным проростом может привести к ложноположительным результатам.

Образцы, содержащие осадок, перед анализом отцентрифугировать в течение 10-15 мин при 2500-3000 об/мин.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Набор биологически безопасен, однако с исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфицированным материалом.

Стоп-реагент при попадании на незащищенную кожу и слизистые может вызывать химические ожоги. В случае попадания на кожу – немедленно промойте пораженный участок водой.

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ

Оборудование и материалы (для «ручной» постановки)

Дозаторы пипеточные (пипетки полуавтоматические одно- и многоканальные переменного объема) для внесения реагентов в лунки планшета с погрешностью дозирования не более 5 % с наконечниками полипропиленовыми одноразовыми.

Ручные, или автоматические промыватели, или восьми- и двенадцатиканальные пипеточные дозаторы для промывания лунок планшета.

Спектрофотометр вертикального сканирования для измерения оптической плотности в лунках планшета при 450 нм и/или в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-650 нм.

Центрифуга лабораторная на 2,5-3,0 тыс. об/мин, термостат на 37 ^оС, холодильник бытовой, фильтровальная бумага.

Вода очищенная (дистиллированная или деионизированная).

70 %-ный раствор спирта этилового и 6 %-ный раствор перекиси водорода (дез.растворы) или растворы иных дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08, кроме хлорсодержащих.

Приготовление рабочих растворов реагентов для ИФА

Перед работой извлечь набор из холодильника, вскрыть упаковку и выдержать все реагенты перед проведением анализа не менее 30 мин при температуре от 18 до 25 ^оС.

Предварительное разведение исследуемых образцов

Исследуемые образцы развести 1:10 во вспомогательном планшете. Для этого внести в его лунки по 90 мкл РПРО и добавить по 10 мкл сыворотки, тщательно перемешать пипетированием. При этом розовый цвет должен измениться на желтый. Если изменение цвета не произошло, данный образец необходимо исследовать повторно с целью исключения неправильных результатов. Рабочее разведение (1:100) готовить непосредственно в лунках иммуносорбента (см. раздел Проведение ИФА («ручная» постановка), п. 2).

Рабочие разведения образцов хранить не более 6 ч при температуре от 18 до
25 ^оС.

Приготовление рабочего промывочного раствора (ФСБ-Т)

При выпадении осадка солей в ФСБ-Т(х25) прогреть его при температуре 37 ^оС до полного растворения осадка.

При постановках с использованием ИФА-анализаторов 80 мл ФСБ-Т(х25) довести водой очищенной до 2 л.

При дробной «ручной» постановке использовать соотношения объемов ФСБ-Т(х25) и воды, указанные в табл. 1 для разного числа используемых стрипов.

Таблица 1

Число стрипов	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12
ФСБ-Т(х25), мл	7	10	13	17	20	23	27	30	33	37	40
Вода очищенная, мл	до 175	до 250	до 325	до 425	до 500	до 575	до 675	до 750	до 825	до 925	до 1000

Готовый рабочий промывочный раствор хранить при температуре от 2 до 8 ºС не более 14 сут.

Приготовление остальных реагентов

К^—, К⁺₁, К⁺₂, К⁺₃, К⁺_4,РИ, РРО,, РПРО, конъюгат, стоп-реагент – готовы к применению.

После вскрытия упаковок неиспользованные реагенты хранить в плотно закрытых упаковках при температуре от 2 до 8 ^оС до истечения срока годности.

Проведение ИФА («ручная» постановка)

Внимание! Соблюдение указанных ниже температуры и времени инкубации планшетов на каждой стадии постановки крайне важно для получения достоверных результатов.

Извлечь из упаковки рамку планшета и необходимое число стрипов. Неиспользованные стрипы допускается хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре от 2 до 8 ^оС до истечения срока годности .
В лунку А1 внести 100 мкл РРО, в следующие лунки внести по 100 мкл контрольных образцов (по 2 лунки на образец), оставшиеся лунки использовать для исследуемых образцов (по 1 лунке на образец), для чего внести в них: вначале по 90 мкл РРО, а затем – по 10 мкл образцов, предварительно разведенных 1:10 в лунках вспомогательного планшета (см. раздел «Предварительное разведение исследуемых образцов»), тщательно перемешать пипетированием.
Инкубировать 30 мин при температуре от 21 до 25 ^оС в защищенном от света месте.
С помощью промывателя удалить образцы из лунок, 4 раза промыть планшет промывочным раствором, внося в лунки 350-370 мкл раствора. При наличии промывателя, позволяющего производить промывку в режиме «Overflow», использовать именно этот режим. При ручной промывке внесенный в лунки рабочий промывочный раствор необходимо выдержать не менее 30 с. По окончании промывки остатки раствора удалить из лунок, постукивая перевернутым планшетом по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.
Во все лунки внести по 100 мкл конъюгата.
Инкубировать 30 мин при температуре от 21 до 25 ^оС ^оС в защищенном от света месте.
С помощью промывателя удалить жидкость из лунок, 4 раза промыть планшет как указано в п. 4.
Во все лунки внести по 100 мкл раствора индикаторного, немедленно поместить планшет в защищенное от света место и выдержать 10-15 мин при температуре от 21 до 25 ^оС.
Во все лунки (в той же последовательности, с которой вносился субстратно-индикаторный раствор) внести по 100 мкл стоп-реагента, осторожно (постукиванием по планшету) перемешать содержимое лунок и не более чем через 10 мин приступить к учету результатов.

Регистрация и учет результатов

Результаты ИФА регистрировать спектрофотометрически, выводя спектрофотометр на нулевой уровень («бланк») по лунке А1 и измеряя оптическую плотность (ОП) при двух длинах волн – 450 нм и 620-650 нм. При отсутствии референс-фильтра на 620-650 нм оптическую плотность (ОП) измерять при длине волны 450 нм.

Результаты ИФА учитываются при следующих условиях:

среднее значение ОП(К⁺₁) не менее 0,20;

среднее значение ОП(К⁺₄) не менее 0,60;

среднее значение ОП(К⁺₂) больше среднего значения ОП(К⁺₁) и меньше ОП(К⁺₃);

среднее значение ОП(К⁺₃) больше среднего значения ОП(К⁺₂) и меньше среднего значения ОП(К⁺₄).

среднее значение ОП(К^—) — не более 0,10,

в противном случае исследование необходимо повторить.

Интерпретация результатов

Исследуемые образцы учитываются:

как положительные при ОП больше 1,1×ОП(К⁺₁),

как отрицательные при ОП меньше 0,9×ОП(К⁺₁).

как сомнительные при ОП в диапазоне от 0,9×ОП(К⁺₁) до 1,1×ОП(К⁺₁).

При получении сомнительных результатов сыворотки рекомендуется исследовать повторно.

Для количественного учета результатов (содержание антител класса G в исследуемых сыворотках в МЕ/мл) строится калибровочный график по точкам, абсциссы которых (логарифмическая шкала) соответствуют значениям активности калибраторов в МЕ/мл (указаны на флаконах), а ординаты (пропорциональная шкала) – соответствующим значениям ОП, полученным в ИФА. Для оценки активности исследуемого образца на калибровочном графике находится точка, ордината которой равна полученному в ИФА с этим образцом значению ОП; абсцисса этой точки будет равна содержанию в образце антител класса G в МЕ/мл.

Если концентрация IgG выше 10 МЕ/мл, образец считается положительным. При обследовании беременных в качестве защитного титра, защищающего от реинфекции рекомендован уровень 25 МЕ/мл.

Если значение ОП испытуемой сыворотки превышает ОП(К⁺₄), ее необходимо исследовать повторно в большем разведении.

Рекомендуемые разведения сыворотки:

при значениях ОП образцов выше ОП(К⁺₄) и ниже 2,0 – 1:200;

при значениях ОП образцов выше ОП(К⁺₄) и выше 2,0 – 1:400.

ИФА-Краснуха IgG авидность

ПОСТАНОВКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИФА-АНАЛИЗАТОРОВ

Подготовить прибор в соответствии с инструкцией по его эксплуатации, ввести программу анализа, соответствующую используемому набору, и провести анализ.

СРОК ГОДНОСТИ

Срок годности набора – 1 год. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит.

ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ

Хранение

В упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 ^оС. Замораживание не допускается.

Транспортирование

При температуре от 2 до 8 ^оС. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 25 ^оС в течение 10 сут.

ИФА-Краснуха IgG авидность

УСЛОВИЯ ОТПУСКА

Для учреждений здравоохранения.

ИФА-Краснуха IgG авидность

По вопросам, касающимся качества набора, следует обращаться по адресу 142530 Московская обл., г. Электрогорск, ул. Буденного, д. 1, ЗАО «ЭКОлаб»; тел. (49643) 3-23-11, факс (49643) 3-30-93 – отдел сбыта, (49643) 3-37-30 – ОБТК и в учреждение, уполномоченное Росздравнадзором на проведение государственного контроля качества указанной продукции.

КРАТКАЯ СХЕМА ПОСТАНОВКИ ИФА

ИФА-Краснуха IgG авидность

Использовать только после тщательного ознакомления с инструкцией!
Внести	в лунку А1– 100 мкл РРО, в лунки B1, С1- по 100 мкл К⁺₁, в лунки D1, E1- по 100 мкл К⁺₂ в лунки F1,G1 – по 100 мкл К⁺₃, в лунки H1,A2 – по 100 мкл К⁺₄, в лунки В2,С2- по 100 мкл К^— в остальные лунки – вначале по 90 мкл РРО, а затем – по 10 мкл образцов, предварительно разведенных 1:10 в лунках вспомогательного планшета (см. раздел «Предварительное разведение исследуемых образцов»)
Инкубация	30 мин, 21-25 ^оС
Промыть	4 раза промывочным раствором
Внести	по 100 мкл конъюгата в каждую лунку
Инкубация	30 мин, 21-25 ^оС
Промыть	4 раза промывочным раствором
Внести	по 100 мкл индикаторного раствора в каждую лунку
Инкубация	10-15 мин, 21-25 ^оС
Внести	по 100 мкл стоп-реагента в каждую лунку
Измерить	ОП при 450 нм (референс 620-650 нм), «бланк» — по лунке А1