ИФА-Лямблиоз-антитела

И Н С Т Р У К Ц И Я по применению набора реагентов «Тест-система иммуноферментная  для выявления суммарных иммуноглобулинов к антигенам рода Lamblia intestinalis» «ИФА-Лямблиоз-антитела»

Регистрационное удостоверение №РЗН 2016/4962  от  02.11.2016  г.

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов «Тест-система иммуноферментная  для выявления суммарных иммуноглобулинов к антигенам рода Lamblia intestinalis»»ИФА-Лямблиоз-антитела» предназначен для одновременного выявления (IgA, IgM, IgG)  к Lamblia intestinalis в сыворотке (плазме) крови человека методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) на твердофазном носителе при «ручной» постановке и с использованием ИФА-анализаторов.

СОСТАВ И КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА

Примечания. 1. Набор включает все реагенты, необходимые для постановки ИФА, кроме очищенной (дистиллированной или деионизированной) воды.

2. ФСБ-Т(х25), РИ, стоп-реагент – унифицированы для всех наборов ЗАО «ЭКОлаб», в которых используются указанные реагенты.

Набор дополнительно укомплектован принадлежностями:

вспомогательными пластиковыми емкостями размером 100х50х19 мм (4 шт.),

одноразовыми наконечниками для автоматических пипеток на 4-200 мкл  (16 шт.);

клейкой пленкой для планшетов размером 85х135 мм (4 шт.).

Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению.

ОСНОВНЫЕ ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Базовый вариант комплектации набора позволяет исследование 96 образцов, включая контрольные (на контрольные образцы  используется 3 лунки). Предусмотрена возможность проведения раздельных исследований с использованием необходимого количества стрипов:

ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

При наличии в исследуемом образце иммуноглобулинов к Lamblia intestinalis происходит связывание их с антигеном Lamblia intestinalis, сорбированным в лунках планшета-иммуносорбента, образовавшийся комплекс антиген-антитело реагирует с внесенным в реакционную среду раствором конъюгата – антителами против IgА, IgМ и IgG человека, меченными пероксидазой хрена. Образовавшийся комплекс «антиген-антитело-конъюгат» выявляется в реакции с субстратно-индикаторным раствором, содержащим хромоген – тетраметилбензидин, в результате которой меняется цвет (оптическая плотность) реакционной смеси в лунке планшета; изменение регистрируется спектрофотометрически.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Аналитическая чувствительность набора определяется по стандартной панели положительных сывороток предприятия, содержащих (IgA, IgM, IgG) к антигенам рода Lamblia intestinalis (СОП⁺-159), как процентное содержание образцов, определенных набором как положительные, и составляет 100%.

Аналитическая специфичность набора определяется по  стандартной панели отрицательных сывороток предприятия, не содержащих (IgA, IgM, IgG)к антигенам рода Lamblia intestinalis (СОП^–-159) как процентное содержание образцов, определенных набором как отрицательные, и составляет 100%.

Диагностическая чувствительность

Статистическая достоверность результатов диагностической чувствительности испытаний составила:

Статистическая достоверность диагностической чувствительности для каждого вида биологического материала составила:

Диагностическая чувствительность для  клинических образцов, суммарно:

Диагностическая специфичность

Статистическая достоверность результатов диагностической специфичности испытаний составила:

Статистическая достоверность диагностической специфичности для каждого вида биологического материала составила:

Диагностическая специфичность для  клинических образцов, суммарно:

ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Сбор образцов крови должен производиться в соответствии с надлежащей практикой методом венопункции (ГОСТ Р 53079.4-2008 «Обеспечение качества клинических лабораторных исследований»).

Нативная сыворотка и плазма  крови (гепарин, ЭДТА, цитрат натрия) человека объемом не менее 20 мкл.

Образцы сыворотки  крови до исследования можно хранить не более 7 сут. при температуре от 2 до 8 ^оС и 3 мес при температуре минус 20 ^оС или более низкой. Допускается только однократное замораживание-размораживание образцов. Размороженные образцы перед исследованием тщательно перемешать.

Не допускается использование для исследования образцов с повышенным содержанием липидов и (или) с признаками гемолиза, и (или) с видимым микробным проростом.

Образцы, содержащие осадок, перед анализом отцентрифугировать в течение 10-15  мин при 2500-3000 об/мин.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

И ОСНОВНЫЕ ПРАВИЛА РАБОТЫ С НАБОРОМ

Потенциальный риск применения набора – класс 2б (Приказ №4н от 06.06.12.).

Набор биологически безопасен, однако с исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфицированным материалом.

К+,К- содержат натрия азид в конечной концентрации 0,01 %. Данная концентрация является безопасной.

Стоп-реагент при попадании на незащищенную кожу и слизистые может вызывать химические ожоги. В случае попадания на кожу – немедленно промойте пораженный участок водой.

Набор реагентов, в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» относится к классу А — отходы, не имеющие контакта с биологическими жидкостями пациентов, инфекционными больными. Класс А – эпидемиологически безопасные отходы, приближенные по составу к твердым бытовым отходам (ТБО).

Утилизацию или уничтожение, дезинфекцию наборов реагентов следует проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» и МУ 287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения».

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ

Оборудование и материалы (для «ручной» постановки)

Дозаторы пипеточные (пипетки полуавтоматические одно- и многоканальные переменного объема) для внесения реагентов в лунки планшета с погрешностью дозирования не более 5 % с наконечниками полипропиленовыми одноразовыми.

Ручные, или автоматические промыватели, или восьми- и двенадцатиканальные пипеточные дозаторы для промывания лунок планшета.

Спектрофотометр вертикального сканирования для измерения оптической плотности в лунках планшета при 450 нм и/или в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-650 нм.

Центрифуга лабораторная на 2,5-3,0 тыс. об/мин.

Термостат на 37 ^оС, холодильник бытовой.

Фильтровальная бумага.

ИФА-анализатор.

Вода очищенная (дистиллированная или деионизированная).

70 %-ный раствор спирта этилового и 6 %-ный раствор перекиси водорода (дез.растворы) или растворы иных дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08, кроме хлорсодержащих.

Приготовление рабочих  растворов реагентов для ИФА

Перед работой извлечь набор из холодильника, вскрыть упаковку и выдержать все реагенты перед проведением анализа не менее 30 мин при температуре  от 18 до 25 ^оС.

Приготовление рабочего промывочного раствора  (ФСБ-Т)

При выпадении осадка солей в ФСБ-Т(х25) прогреть его при температуре  37 ^оС до  полного растворения осадка.

В зависимости от числа используемых стрипов отобрать необходимый объем концентрата и довести его водой очищенной до объема, указанного в табл. 1

Таблица 1

Готовый рабочий промывочный раствор хранить при температуре от 2 до 8 ºС не более 14 сут.

Приготовление остальных реагентов

Иммуносорбент, К⁺, К^–, _, РРО, конъюгат, РИ, стоп-реагент – готовы к применению.

Проведение ИФА («ручная» постановка)

Внимание! Соблюдение указанных ниже температуры и времени инкубации планшетов на каждой стадии постановки крайне важно для получения достоверных результатов.

1. Извлечь из упаковки рамку планшета и необходимое число стрипов.
2. Стрипы промыть 1 раз ФСБ-Т, внося в лунки 350-370 мкл раствора. При наличии промывателя, позволяющего производить промывку в режиме «Overflow», использовать именно этот режим. По окончании промывки остатки раствора удалить из лунок, постукивая перевернутым планшетом по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.
3. Внести в три лунки контрольные образцы (в одну лунку – 100 мкл К⁺, в две лунки – по 100 мкл К^–). В остальные лунки внести по 100 мкл РРО. Затем в лунки с РРО внести по 10 мкл исследуемых образцов, содержимое лунок перемешать пипетированием (при этом цвет РРО должен измениться).

Примечание. При постановке ИФА на одном стрипе допускается использовать по 1 лунке на каждый контрольный образец.

4. Планшет закрыть крышкой или заклеить клейкой лентой. Инкубировать 30 мин при температуре 37^оС в защищенном от света месте.
5. С помощью промывателя удалить образцы из лунок, 5 раз промыть планшет промывочным раствором, как указано в п. 2.
6. В лунки внести по 100 мкл конъюгата. Инкубировать 30 мин при температуре 37^оС в защищенном от света месте.
7. С помощью промывателя удалить жидкость из лунок, 5 раз промыть планшет как указано в п. 2.
8. Во все лунки внести по 100 мкл раствора индикаторного, немедленно поместить планшет в защищенное от света место и выдержать 15 мин при температуре 37^оС.
9. Во все лунки (в той же последовательности, с которой вносился субстратно-индикаторный раствор) внести по 100 мкл стоп-реагента, осторожно (постукиванием по планшету) перемешать содержимое лунок и не более чем через 5 мин приступить к учету результатов.

Регистрация и учет результатов

Результаты ИФА регистрировать спектрофотометрически, измеряя оптическую плотность (ОП) при двух длинах волн – 450 нм и 620-650 нм. При отсутствии референс-фильтра на 620-650 нм ОП измерять при длине волны 450 нм, а выведение спектрофотометра на нулевой уровень («бланк») осуществлять по воздуху.

Результаты ИФА учитываются только при следующих условиях:

среднее значение ОП(К⁺) – не менее 0,50;

среднее значение ОП(К^–) – не более 0,20,

В противном случае исследование необходимо повторить.

Рассчитать критическое значение оптической плотности, ОП_крит., по формуле

ОП_крит.= ОПК‾_ср+ 0,35

где ОПК‾_ср – среднее значение ОП в лунках с К‾;

0,35 – коэффициент, полученный экспериментальным путем.

При ОП_{иссл.обр} больше 1,2×ОП_Крит образец считается положительным и содержащим иммуноглобулины к антигенам рода Lamblia intestinalis.

При ОП_{иссл.обр} меньше 0,9×ОП_Крит образец считается отрицательным, т.е. не содержащим иммуноглобулины к антигенам рода Lamblia intestinalis.

При ОП_{иссл.обр} в интервале от 0,9×ОП_Крит до 1,2×ОП_Крит образец считается сомнительным; исследование такого образца рекомендуется повторить.

Интерпретацию результатов анализа проводит лечащий врач с учетом клинических признаков  и результатов прямых методов анализа (дуоденальное зондирование, копроовоскопия).

Следует учитывать возможность перекрестных серологических реакций при заболеваниях описторхозом, трихинеллезом, токсокарозом  и эхинококкозом. Это может быть связано как с совместной инвазией, так и с взаимодействием антител с гетерологичными антигенами за счет наличия общих антигенных компонентов.

Титрование положительного образца

Тест-система позволяет выполнить определение титра антител в выявленном положительном образце. Для этого, на отдельном стрипе необходимо провести ИФА с соответствующим образцом в последовательных двукратных разведениях его раствором РРО от 1:10 до 1:1280.

Для приготовления указанных разведений в верхнюю лунку стрипа внести 180 мкл раствора РРО, в остальные лунки стрипа – по 100 мкл раствора РРО. Затем в верхнюю лунку стрипа внести 20 мкл выявленного положительного образца, тщательно перемешать пипетированием и перенести 100 мкл полученного разведения (1:10) во вторую лунку, тщательно перемешать пипетированием, перенести 100 мкл полученного разведения (1:20) в третью лунку и так – до последней лунки стрипа. Из последней лунки стрипа отобрать 100 мкл разведения (1:1280) и слить его в дезинфицирующий раствор.

Далее провести ИФА как указано в п. Проведение ИФА («ручная» постановка).

ПОСТАНОВКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИФА-АНАЛИЗАТОРОВ

Подготовить прибор в соответствии с инструкцией по его эксплуатации, ввести программу анализа, соответствующую используемому набору, и провести анализ.

СРОК ГОДНОСТИ

Срок годности набора – 1 год. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит.

Хранение

В упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 ^оС. Замораживание не допускается.

После вскрытия упаковок неиспользованные реагенты допускается хранить в плотно закрытых упаковках при температуре от 2 до 8 ^оС до истечения срока годности.

Транспортирование

При температуре от 2 до 8 ^оС транспортом всех видов в крытых транспортных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 25 ^оС в течение 10 сут.

УСЛОВИЯ ОТПУСКА

Для учреждений здравоохранения.

ГАРАНТИИ ПРОИЗВОДИТЕЛЯ

По вопросам, касающимся качества и обращения  набора реагентов «Тест-система иммуноферментная  для выявления суммарных иммуноглобулинов к антигенам рода Lamblia intestinalis»»ИФА-Лямблиоз-антитела», следует обращаться по адресу 142530 Московская обл., г. Электрогорск, ул. Буденного, д. 1. ЗАО «ЭКОлаб»; тел. (49643) 3-23-11, факс (49643) 3-30-93 – отдел сбыта, (49643) 3-37-30 – ОБТК.

КРАТКАЯ СХЕМА ПОСТАНОВКИ ИФА

(«ИФА-Лямблиоз-антитела»)

Использовать только после тщательного ознакомления с инструкцией!

Ноябрь 2016 г

ИФА-Лямблиоз-антитела