Гемофилус агар Оболенск

«Питательная среда для культивирования и выделения гемофильной палочки, готовая к применению Гемофилус агар» предназначена для бактериологических исследований в клинической микробиологии с целью культивирования  и выделения бактерий рода Haemophilus.

2. характеристика Гемофилус агар Оболенск

Гемофилус агар Оболенск представляет набор, состоящий из основы среды (далее — Основа) — 1 флакон, ростовой добавки (РД) — 1 флакон и селективной добавки (СД)  — 1 флакон.

Основа представляет собой непрозрачный гель темно-коричневого или черного цвета, стерильный, разлитый по 100 мл во флаконы вместимостью 100 мл, РД — пористая масса белого цвета, стерильная, расфасована во флаконы вместимостью 10 мл, СД — порошок белого цвета, расфасован во флаконы вместимостью 10 мл.

3. Принцип действия Гемофилус агар Оболенск

Основа, содержащая стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, обогащена фактором Х (гемин). Другой фактор, необходимый для роста бактерий рода Haemophilus (V-фактор — никотинамидадениндинуклеотид — НАД), содержится в РД. Совокупность компонентов, входящих в состав набора (Основа, РД и СД) обеспечивает рост бактерий рода Haemophilus, образование капсулы у капсульных форм Haemophilus influenzae и ингибирование микробов-ассоциантов.

4. состав, г/л:

Состав Основы, г/л:

Флакон с РД содержит 0,1 мг НАД.

Флакон с СД содержит 30 мг бацитрацина.

5. аналитические и диагностические характеристики Гемофилус агар Оболенск

Гемофилус агар Оболенск обеспечивает рост тест-штаммов Haemophilus influenzae 423(тип b) и Haemophilus influenzae АТСС 9006 при посеве по 0,1 мл взвеси каждого тест-штамма из разведения 10^-6 через 18-24 ч инкубации посевов при температуре (37±1) °С в атмосфере 5-10 % СО₂ в виде слизистых, круглых, сероватого цвета, полупрозрачных колоний диаметром до 2 мм.

Питательная среда полностью подавляет рост тест-штаммов микробов-ассоциантов: Streptococcus pyogenes Dick-1, Neisseria meningitidis A 208 при посеве 0,1 мл взвеси из разведения 10^-4 через 48 ч инкубации при температуре (37±1)^о С. N.meningitidis A-208 культивируют в атмосфере 5-10 % СО₂.

Взвеси используемых тест-штаммов микроорганизмов готовятся по стандартному образцу мутности на 10 ед (ОСО 42-28-85 П) путем ряда десятикратных разведений.

6. меры предосторожности Гемофилус агар Оболенск

При работе с образцами и микробными культурами необходимо соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения» (Москва, 1981г.) и СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV группы патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

— Не использовать компоненты Гемофилус агара по истечении срока годности

— Не использовать флаконы набора Гемофилус агара со следами контаминации.

— После смешивания компонентов Гемофилус агар следует полностью использовать (не плавить повторно!).

7. оборудование и материалы Гемофилус агар Оболенск

• Термостат, обеспечивающий температуру (37±1) °С;
• генераторы атмосферы, обогащенной 5-10% СО_2, или парафиновая свеча;
• контейнер для инкубации (анаэростат или «свечной» сосуд);
• водяная баня или автоклав, работающий в режиме «стерилизации текучим паром»;
• чашки Петри;
• пипетки стеклянные, позволяющие отбирать объемы жидкости 2 мл;
• вода дистиллированная, стерильная.

8. анализируемые образцы Гемофилус агар Оболенск

Клинический материал от больных гнойным бактериальным менингитом и другими заболеваниями инфекционной природы, вызываемыми бактериями рода Haemophilus. Среду можно использовать также при работе с чистыми культурами Haemophilus.

9. проведение анализа Гемофилус агар Оболенск

Исследования образцов проводятся в соответствии с рекомендациями, изложенными в Методических рекомендациях для микробиологов «Выделение, идентификация и определение чувствительности к антибиотикам Haemophilus influenzae«, КМАХ. — 2000. — Т. 2. — С. 93-109 и МУК 4.2.1887-04 «Лабораторная диагностика менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов».

9.1. Подготовка к анализу

Подготовка раствора ростовой добавки.

1. Выдержите флакон с РД до достижения комнатной температуры.
2. В асептических условиях растворите содержимое флакона с РД в 2 мл стерильной дистиллированной воды.
3. Перемешайте до полного растворения.

Приготовление чашек со средой.

1. Не вскрывая, поместите флакон с Основой на водяную баню с температурой 50 °С и поднимите температуру до 95 °С, выдерживайте приблизительно 30-40 минут до полного растворения агара. Возможно расплавление Основы в автоклаве в режиме «стерилизации текучим паром».
2. Перемешайте.
3. Охладите Основу до 45-50 °С.
4. Вскройте флакон с Основой и внесите в охлажденную Основу ростовую добавку из расчета содержимое 1 флакона с РД (2 мл) на 100 мл Основы (содержимое 1 флакона с Основой).
5. При необходимости вместе с РД внесите СД из расчета 1 флакон на 1 флакон Основы, предварительно растворив ее в 2 мл стерильной дистиллированной воды. (После растворения РД и СД не хранить, использовать немедленно.)
6. Перемешайте и разлейте в чашки Петри (18-20 мл на чашку).
7. Чашки с готовой средой можно хранить при температуре 4-8 °С не более 7 дней без заметного изменения ростовых свойств.

   • Посев и инкубация

8. Перед посевом выдержите чашки со средой до достижения комнатной температуры.
9. Произведите посев на чашки сразу после получения образцов.
10. Инкубируйте чашки в атмосфере, обогащенной 5-10% СО
11. Инкубируйте чашки в перевернутом положение (крышкой вниз) при температуре 37 °С, Время инкубации зависит от типа образца и целей исследования. Как правило, учет результатов проводится через 24-48 ч.

12. Учет результатов Гемофилус агар Оболенск

Учет результатов проводят визуально в соответствии с «Методами контроля бактериологических питательных сред: Методические указания (МУК 4.2.2316-08)». Через 24 ч инкубации штаммы H. influenzae формируют слизистые, сочные, полупрозрачные, гладкие колонии сероватого цвета диаметром до 2 мм.

Для чистой культуры гемофильной палочки характерно наличие специфического «мышиного» запаха.

11. условия хранения и эксплуатации набора Гемофилус агар Оболенск

Флаконы с Основой необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30 С. Флаконы с РД и СД хранить герметично закрытыми при температуре 2-8 °С.

Срок годности — 1 год.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

По вопросам, касающимся качества набора реагентов «Питательная среда для культивирования и выделения гемофильной палочки, готовая к применению (Гемофилус агар)» в течение срока годности следует обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279 Оболенск, Московская обл., Серпуховский р-н, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», тел. (4967) 36-00-20, факс 36-01-16.

Гемофилус агар Оболенск