Диагностикум ГЛПС для непрямого ИФА

Инструкция по применению Диагностикум ГЛПС для непрямого ИФА

Диагностикум геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС)    для    непрямого   метода   иммунофлуоресценции   (НИФ) (Диагностикум ГЛПС для непрямого ИФА),   предназначен   для  выявления  специфических  антител  в  сыворотках  крови   людей,   а   также   в   сыворотках   крови   диких  и   лабораторных   животных.

Выпускается в виде набора, который включает следующие компоненты:

• антигенный препарат  (АГ+)  – предметное стекло, на поверхность которого нанесен  хантавирусный антиген, инактивированный. АГ+ имеет  вид  серых  пятен  высушенной  суспензии  антигенсодержащих  клеток  диаметром  2-3 мм, по 7 пятен в ряду по длине предметного стекла  и  по 3  пятна в ряду по ширине предметного стекла; стекла обернуты в фольгу алюминиевую;
• положительный контрольный   образец   анти-Хантаан   (К1⁺),    сухой    –    сыворотка    крови    реконвалесцента     после    ГЛПС,      содержащая    антитела    к   хантавирусам    серотипов    Хантаан,    Добрава/Белград,     Сеул,    инактивированная,    лиофилизированная;    пористая масса желтовато-белого цвета;

Взамен Инструкции по применению, утвержденной 19 мая 1999 года

• положительный контрольный    образец   анти-Пуумала   (К2⁺),  сухой    –    сыворотка     крови    реконвалесцента     после     ГЛПС,    содержащая     антитела     к     хантавирусу     серотипа     Пуумала, инактивированная, лиофилизированная; пористая масса желтовато-белого цвета;
• отрицательный контрольный    образец    (К^—),    сухой ― сыворотка крови    человека,    не    содержащая    антител    к    хантавирусам,    инактивированная, лиофилизированная; пористая масса желтовато-белого цвета;
• ФИТЦ – коньюгат, сухой ―  антитела  против  иммуноглобулинов  человека      меченные      флюоресцеинизотиоцианатом     (ФИТЦ),     содержит    в    качестве    контрастера    Эванс-голубой    (1:50 000);   пористая масса серо-голубого цвета;
• вода очищенная для разведения реагентов; прозрачная

бесцветная жидкость.

Набор рассчитан на исследование 210 образцов, включая контрольные.

Назначение.  Выявление  специфических  антител  к  хантавирусам  в сыворотках   крови    людей,    а    также    в    сыворотках    крови   диких   и   лабораторных животных, для использования in vitro.

Способ применения

Проведение реакции НИФ

Приготовление растворов и реагентов для НИФ.

• Фосфатно-солевой буфер   (ФСБ)  –  раствор    для    титрования    контрольных сывороток: в колбу ёмкостью 1 л вносят 8,7 г натрия хлорида  (NaCl),  1,8 г   натрия   фосфорнокислого   двузамещенного   2-х  водного  (Na₂HPO₄ х 2Н₂О),  1,25  г  натрия   фосфорнокислого  однозамещенного   безводного   (Na₂HPO₄);   растворяют   в   воде,   доводят общий объём до 1 л. Устанавливают рН 7,4 с помощью 1N раствора натрия гидроокиси (NaOH). Хранение: 7 сут при 2-8 ⁰С
• Физиологический раствор  (ФР) – 0,9%  раствор  хлорида  натрия  для отмывки  стекол  с  препаратами:  в  колбу  емкостью  1  л  вносят  9  г натрия   хлорида  (NaCl),  растворяют   в   воде  и  доводят  общий   объем до 1 л.

Хранение: до 14 суток при 2-8 ⁰С.

• Контрольные образцы К1⁺  и  К2⁺  и  К^—  растворяют  в  0,2  мл  воды  и разводят  на  ФСБ  или  ФС до рабочего разведения, указанного на флаконе.
• ФИТЦ-конъюгат растворяют  в  0,25  мл  воды  и  доводят  ФСБ  или ФС до рабочего разведения, указанного на флаконе.

Хранение:  растворенные  сыворотки  и  коньюгаты  хранят  при  температуре 2-8 ⁰С в течение 1 недели.

Перед    использованием    стекла    с    антигенным    препаратом,    хранившиеся  при  температуре  не  выше  минус  20 ⁰С,  подсушивают  при комнатной    температуре   (16-24 ⁰С),   промывают   дистиллированной    водой и высушивают в тех же условиях.

Во   вспомогательном   ряду   пробирок   или   лунок   пластиковых  панелей    на    ФСБ    готовят   двукратные   разведения    исследуемых   сывороток  крови  людей  и,  начиная  с  разведения  1:16,  наносят по одной капле  (5 мкл)  на  отдельное  «пятно».  На  каждое  стекло  наносят  также 3 контрольные  сыворотки  в  рабочих  разведениях.  Препараты  с нанесенными исследуемыми и контрольными образцами помещают во влажную  камеру  и  инкубируют  при  37 ⁰С  в  течение  30  мин  или при 2-8 ⁰С  в  течение 18 ч  после  окончания  инкубации  препараты  3-кратно по 3  мин  выдерживают  в  физиологическом  растворе,  промывают  в течение 1 мин  дистиллированной водой и высушивают при комнатной температуре. На каждое «пятно» наносят ФИТЦ-коньюгат в рабочем разведении  по  1  капле  (5 мкл).  Препараты  инкубируют  во  влажной камере  при  температуре  37 ⁰С  в  течение  30  мин,  после  чего 3-кратно по   5   мин   выдерживают   в   физиологическом   растворе,   промывают   в

течение 1 мин дистиллированной водой и высушивают при комнатной температуре.

Учет результатов Диагностикум ГЛПС для непрямого ИФА

Препараты исследуют с помощью люминесцентного микроскопа ЛЮМАМ-2  или  другой  марки  под  водно-иммерсионным  объективом (х40  или  х60).  Для  хантавирусов  характерна  локализация специфического  антигена  с  четкой  гранулярной  структурой  в цитоплазме клеток. Яркое изумрудно-зеленое зернистое свечение цитоплазмы  клеток,  содержащих  антиген  хантавируса,  просматривается на фоне от серо-бурого до темно-коричневого или кирпично-красного окрашивания структуры неинфицированных клеток.

Интенсивность специфического сведения антиген содержащих клеток оценивают по условной 4-х крестовой шкале:

++++ (4 креста) – интенсивная яркая изумрудно-зеленая флюоресценция;

+++ (3 креста) – яркая зеленая флюоресценция;

++ (2 креста) – отчетливое зеленое свечение;

+ (1 крест) – тусклое зелено-серое сведение;

0 – свечение отсутствует.

Реакцию учитывают при отсутствии специфического свечения с К-.

Положительной  считают  пробу  (разведение)  с  интенсивностью  свечения 2 (++) креста.

Оптимальные сроки забора и обследования сывороток крови для определения  4-кратного  и  более  нарастания  титра  специфических антител:

1-я сыворотка – при поступлении больного в стационар или  при обращении  в  поликлинику; 2-я – через 3-4 дня после взятия 1-ой сыворотки.   В   случае   отсутствия   нарастания   титра   антител  в  парных сыворотках,  следует  произвести  забор 3-й сыворотки через 7-10 дней после взятия второй сыворотки.

Форма выпуска:      выпускается в наборе из 6 компонентов:

• АГ+ – 10 предметных стекол.
• К1+ – 1 ампула (0,2 мл)
• К2+ – 1 ампула (0,2 мл)
• К^— – 1 амплуа (0,2 мл)
• Вода – 1 ампула (1,0 мл)
• ФИТЦ-коньюгат – 1 флакон (0,25 мл)
• Инструкция по применению – 1 шт.

Срок годности Диагностикум ГЛПС для непрямого ИФА– 2 года.

Диагностикум ГЛПС с истекшим сроком годности применению не подлежит

Условия отпуска Диагностикум ГЛПС для непрямого ИФА. Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений.

Транспортирование Диагностикум ГЛПС для непрямого ИФА:  в  соответствии  с  СП 3.3.2.1248-03   при   температуре  от  2  до  8 ⁰С.  Допускается  транспортирование  при температуре до 20 ⁰С в течение не более 2-х сут.

Хранение Диагностикум ГЛПС для непрямого ИФА:  К1+,  К2+,  К^—,  ФИТЦ-коньюгат  в  соответствии  с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 ⁰С. Препарат подлежит разукомплектации при получении: предметнее стекла с АГ+ хранят при температуре не выше минус 20 ⁰С. Препарат хранить в недоступном для детей месте.  Диагностикум ГЛПС для непрямого ИФА

Диагностикум ГЛПС для непрямого ИФА